实验专栏丨做好细胞划痕,只需这4步-中洪博元医学实验帮
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细胞划痕(修复)法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上邢念增,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线玖月牙晓,去除中央部分的细胞校条祭,然后继续培养细胞至实验设定的时间(例如72h),取出细胞培养板高圣凯,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力蔡炳丁,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
一.实验材料及试剂
直尺、marker笔、6孔板、显微镜、酒精灯、移液枪、CO2培养箱等;PBS等。
二、实验内容
1、所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)。
2、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道吐司网,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
3、在空中加入约5×105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。
4、第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直绿茵全能王,不能倾斜。
5、用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
6、放入37℃,5%CO2培养箱,培养。通过显微镜拍照。
三、注意事项
1、在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。
2、铺细胞最好使用6孔板,因为6空板可以保证有相当距离的平直划痕,而且因为有5条定位线,与划痕相交,这样就有10个可固定监测点,不作重复,误差也很小。
3、一般做划痕实验雷润民,都是无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略李燕宁。
4、实验时应注意细胞生长状况,选择适当的细胞接种浓度。对不同的细胞要观察细胞的贴壁率等,确定实验时细胞的接种数量和培养时间,保证培养终止时密度适当邓永佳。
5、如果你连续监测24小时半个保镖,你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果,而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移,你可以先用丝裂霉素(1 μg/ml)处理一小时,抑制细胞的分裂,这样你的结果就是细胞迁移的作用了。另外,郑秋泓使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响项天骐。
6、照片拍完之后,可以用image J 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。
7、虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多梁山小霸王。
四、划痕法测量迁移的不足之处:
适用的细胞范围林知誉小,一般只能适用于上皮细胞、纤维样细胞。因为:
(1)这些细胞本身有迁移能力,且较强;
(2)细胞有极性,方便测量,观察;
(3)细胞对无血清有较强的忍受力(至少24小时),因此很多肿瘤细胞系是不适合做划痕的。
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